本发明涉及鱼类养殖技术领域，尤其是涉及一种野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂。

背景技术：

异齿裂腹鱼隶属于鲤形目,鲤科,裂腹鱼亚科,裂腹鱼属,俗称欧氏弓鱼,副裂腹鱼,异齿弓鱼,地方名为棒棒鱼,是一种我国特有的高原冷水性鱼种,分布于雅鲁藏布江中上游干支流及附属水体中。当地藏胞受宗教文化影响,一般不食用鱼类,但近年来由于受内地饮食文化影响和游客大量涌入,该鱼已成为雅鲁藏布江沿线地区的一道特色。

近年来随着经济的发展，人们对雅鲁藏布江的开发力度逐渐加大，由于水利工程建设、过度捕捞等一系列人类活动的加剧，导致异齿裂腹鱼等土著鱼类的种群数量急剧下降。由于高原地区水温很低，异齿裂腹鱼生长缓慢、性成熟晚，其种群一旦受到破坏，将很难恢复，因而对异齿裂腹鱼的保护显得尤为重要和紧迫。

由于缺乏驯养的异齿裂腹鱼，现在开展异齿裂腹鱼人工繁殖的亲本全部来源于栖息地天然水体的自然群体，在开展异齿裂腹鱼人工繁殖工作后，将亲鱼直接投放于池塘，产后亲鱼特别是雌鱼死亡率高达70～85％，参照低海拔区域鱼类产后亲鱼养护方法无法有效降低产后亲鱼死亡率。在对异齿裂腹鱼采用人工繁殖技术后，往往人为将异齿裂腹鱼卵巢中成熟卵一次性排空，导致异齿裂腹鱼依靠累积多年的营养物质消耗殆尽，体质虚弱，影响了后期性腺发育和繁殖活动。产后亲鱼的恢复和营养物质的强化培育将弥补亲鱼营养物质流失所带来的不利影响。目前，针对异齿裂腹鱼产后饲料添加剂的研究较少。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明旨在提出一种野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂，由包括如下重量份数的原料制成：基础营养剂60-80份、蚓激酶3-8份、肉苁蓉提取物1-10份和螺旋藻多糖1-5份。

进一步，由包括如下重量份数的原料制成：基础营养剂65-75份、蚓激酶6份、肉苁蓉提取物8份和螺旋藻多糖3份。

肉苁蓉是一种非常昂贵的中药，是一种寄生在沙漠树木梭梭根部的寄生植物，从梭梭寄主中吸取养分及水分，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值，是中国传统的名贵中药材，主要功效是补肾阳、益精血、润肠通便。

苯乙醇苷类是肉苁蓉中的主要活性成分，比如松果菊苷，环烯醚萜苷是肉苁蓉属植物主要化学成分类别之一。肉苁蓉中还含有木脂素类、生物碱、单萜苷、多糖，此外，还有氨基酸、无机微量元素。

在肉苁蓉提取物当中多糖成分是比较高的，肉苁蓉多糖对淋巴细胞的形成和活性都有显著的影响，它能增加淋巴细胞的增殖反应，从而增强机体的免疫功能。肉苁蓉提取物中所含有的苯乙醇苷能很好对抗人体的氧化反应进行，含有的苯丙醇糖能够结合自由基，改善腺体的分泌能力，调节内分泌，含有的缠腰花雾歧化酶能够清除体内自由基，减缓自由基对细胞的损伤。另外，肉苁蓉还含有洋丁香酚苷、红景天苷等化学成份，能有效促进性中枢神经的功能，增强性激素的分泌和相关递质的释放，有利于野生异齿裂腹鱼产后调节及恢复。肉苁蓉还能增加糖原储备，减少运动后肌肉蛋白质分解，促使线粒体发生适应性肥大和增生，以满足鱼类产后康复所需要的能量。

蚓激酶是从特种蚯蚓中提取的活性最高的蛋白水解酶，它能激活人体的各种细胞，尤其对处于供血不足组织中的休克及半休克状态中的细胞，能使其快速恢复正常生理功能和生物活性，通常是用于脑血栓、脑梗塞后遗症及心肌梗塞等心脑血管疾病。而且，蚓激酶还能快速修复被血油破坏损伤的血管内皮细胞，恢复血管内膜的韧性和弹性，并使血液中有益的高密度脂蛋白的含量升高，使变硬变脆的血管恢复弹性。基于这一特性，通过添加一定量的蚓激酶可以对产后野生异齿裂腹鱼体内的细胞起到一定的恢复、激活的作用，使其快速恢复正常生理功能和生物活性。

世界卫生组织将螺旋藻称为“21世纪人类最佳的保健品”，螺旋藻中含丰富的营养元素，其中的螺旋藻多糖是一种天然的保健品，无任何副作用，螺旋藻多糖具有抗辐射、抗氧化防衰老、提高免疫力等作用。所有这些作用均有利于提高机体的抗病能力，特别是其免疫增强作用，改善造血功能及促进蛋白质合成的作用，这一作用起到了延缓细胞衰老的作用。因此，通过添加螺旋藻多糖能够有效提高鱼类的免疫能力，从而促进产后亲鱼快速修复。

进一步，所述基础营养剂由包括如下重量份数的原料制成：益母草20-25份、枸杞10-15份、党参1-5份、熟地1-5份、干姜5-10份、半夏2-3份、黄芪1-3份、川芎5-10份、红枣10-15份和复合维生素1-10份。

这些中草药大多具有活血保健的效果，增强免疫能力，促进亲鱼体质的恢复，促使亲鱼受伤部位快速愈合，提高产后亲鱼的成活率。

进一步，所述复合维生素包括维生素a、维生素b、维生素c、维生素d。

这些维生素是鱼类生长过程中必须添加的，尤其是产后，亲鱼的各项机能会下降，额外补充维生素能够加快提升机体免疫力，提高抗氧化、抗应激的能力。

进一步，所述肉苁蓉提取物为甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物的混合物。

在春天，当其秧苗仍未或刚长出地面时就被挖出，随后切除花序，切成片状并在阳光下干燥，其被称作“甜苁蓉”。而那些在秋天采集并在盐水中浸泡的，则被称为“咸苁蓉”；在除去盐分后，其被切片，以阳光干燥或以水和酒蒸并在空气中干燥。春季的肉苁蓉多糖含量低一些会稍微苦一些的，秋季的肉苁蓉多糖含量高，味道就会好很多。而且由于其生长期不同，甜苁蓉和咸苁蓉中的营养成分也有所不同，通过不断试验发现，通过调配不同比例的甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物用量，其效果也有所差异，也进一步说明了二者之间营养成分的差异。

进一步，所述肉苁蓉提取物由包括如下步骤的方法制备得到：

1)取甜苁蓉和咸苁蓉并将其分别粉碎，得到甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末；

2)分别用低级醇超声预处理甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末；

3)分别高温水浸提步骤2)的预处理产物，浸提产物经离心或抽滤后得滤液；

4)分别对2种滤液进行减压浓缩后冻干得甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物；

5)将甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物按照重量份数比1:3混合得肉苁蓉提取物。

本发明还提供了一种如上述任一项所述的野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂的制备方法，该方法包括如下步骤：

1)取甜苁蓉和咸苁蓉并将其分别粉碎，得到甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末；

2)分别用低级醇在25-30℃的条件下300-500w超声预处理甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末30-60min，且粉末与低级醇的料液比为1:5-8(m/v)；

3)分别向步骤2)的预处理产物中加入5-10倍体积的纯水，80-100℃浸提3-5h，后经离心或抽滤后得滤液；

4)分别对2种滤液进行减压浓缩后冻干得甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物；

5)将甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物按照重量份数比1:3混合得肉苁蓉提取物；

6)将配方量基础营养剂、蚓激酶、肉苁蓉提取物和螺旋藻多糖充分混合均匀得到添加剂粉剂。

进一步，所述低级醇的质量浓度为90-95％。

进一步，所述低级醇为乙醇或丁二醇或甲醇。

优选为乙醇，其用相同质量或体积的丁二醇或甲醇替换，不影响工艺效果。

本发明还提供了一种如上述任一项所述的野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂的使用方法，该添加剂的日投量为鱼平均体重的5-10％。

本发明的添加剂还可以与药学上可接受的辅剂(如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等)组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂，如片剂、丸剂、胶囊、粉剂、混悬剂、颗粒剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液等剂型以及各种缓释剂型。

相对于现有技术，本发明所述的野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂具有以下优势：

(1)本发明所述的野生异齿裂腹鱼产后亲鱼饲料添加剂能够明显增强亲鱼体质，促进性腺发育，提高产卵排精的能力，优化精卵质量，同时还提高亲鱼的重复利用率，有利于亲鱼产后修复。

(2)通过实验结果可以发现，只有当添加剂中同时添加蚓激酶、肉苁蓉提取物和螺旋藻多糖对亲鱼的繁殖是最有利的，可能是肉苁蓉提取物中的有效成分提高了亲鱼自身的免疫功能和调节能力，有利于亲鱼产后恢复；而且肉苁蓉中的丁香酚苷等化学成分能够刺激性激素的分泌，有利于亲鱼的排卵排精，同时还能提高苗种质量。蚓激酶能激活人体的各种细胞，使其快速恢复正常生理功能和生物活性，有利于提高亲鱼产前的自身抵抗力以及产后亲鱼身体机能的恢复，同时还有利于亲鱼产卵排精。螺旋藻具有抗氧化效果，能够减少产卵排精时细胞氧化过激反应产生的氧自由基，同时还提高机体抗病能力，加快亲鱼产后修复及产卵排精能力。而且不同比例的甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物对亲鱼的影响也不同，咸苁蓉提取物多其效果更好，而且同时添加甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物比单独使用其中一种的效果要好。说明甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物之间存在协同效果，这种效果不是单独使用某一种能够达到的。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

下面将结合实施例来详细说明本发明。

实施例1肉苁蓉提取物制备

1)分别取100g甜苁蓉和咸苁蓉并将其分别粉碎，得到甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末；

2)分别用质量浓度为90％的乙醇在28℃的条件下300w超声预处理甜苁蓉粉末和咸苁蓉粉末45min，且粉末与低级醇的料液比为1:6(m/v)；

3)分别向步骤2)的预处理产物中加入10倍体积的纯水，100℃浸提3.5h，之后进行6000g离心10min，所得上清滤液；

4)分别对2种滤液进行减压浓缩后冻干得甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物；

5)分别按照甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物重量份数比为1:0、1:1、1:3、3:1和0:1混合得肉苁蓉提取物a、b、c、d、e。

实施例2添加剂的制备

分别按照表1所示混合基础营养剂、蚓激酶、肉苁蓉提取物和螺旋藻多糖得到添加剂粉剂，制备添加剂1-9号。

其中，基础营养剂包括益母草23g、枸杞10g、党参3g、熟地3g、干姜6g、半夏2g、黄芪1g、川芎6g、红枣12g和复合维生素5g，复合维生素包括维生素a1g、维生素b族2g、维生素c1g、维生素d1g。

表1添加剂成分表

3、对亲鱼产卵的影响实验

(1)亲鱼筛选与营养强化

挑选100尾雄性和200尾雌性养殖异齿裂腹鱼为后备亲鱼，所选雄性异齿裂腹鱼平均重量3.5kg，雌性平均重量为4.3kg。之后将后备亲鱼随机平均分成10组，并分开饲养。其中9组每日两餐随饲料同时投喂1-9号添加剂，进行营养强化，该添加剂的日投量为鱼平均体重的8％；剩余一组作为对照组只投喂饲料。

(2)催熟及人工催产

亲鱼营养强化3个月，开始进行亲鱼的催熟和人工催产。在养鱼池中挂帆布水袋，进水加丁香酚，将亲鱼捞入其中进行麻醉。背部肌肉注射促黄体素释放激素a3催熟，计量为每千克鱼注射1μg；10天后即进行催产，药物采用促黄体素释放激素a3和绒毛膜促性腺激素(hcg)混合使用，计量为每千克鱼注射10μg，雄鱼剂量减半。

(3)受精卵收集与孵化

在原养鱼池里套100目纱绢网，将催产后的亲鱼放入其中，亲鱼在50h之后开始陆续产卵，用100目拖网收集受精卵与孵化桶，过滤清洗除去杂物后转入池塘孵化水袋，微充气进行孵化，每亩放1.4kg受精卵，孵化后观察鱼卵黄囊吸收情况，在其完全吸收前解开水袋放出育苗，随机进入育种培育环节。

表2亲鱼繁殖效果比较

投喂本发明配方所制备的添加剂的亲鱼经3个月营养强化后体重增重明显，性腺发育良好，崔产后亲鱼排卵时间较为集中，从表2可以看出，卵子受精率和受精卵孵化率均在90％以上，仔鱼畸形率较低，而且仔鱼体质健壮，游动能力强。而未采用本发明配方的添加剂及不使用该添加剂的亲鱼体重增加相对较少，性腺发育一般，卵子受精率和受精卵孵化率均低于90％，仔鱼畸形率也较高，苗种质量较差，成活率较低。而且6-9号及对照组在第一次催产后96h仍未见产卵，随即进行同样药物剂量进行第二次催产，54h后陆续产卵，收集到的受精卵数量较少。

通过表2显示的结果可以发现，只有当添加剂中同时添加蚓激酶、肉苁蓉提取物和螺旋藻多糖对亲鱼的繁殖是最有利的，可能是肉苁蓉提取物中的有效成分提高了亲鱼自身的免疫功能和调节能力，有利于亲鱼产后恢复；而且肉苁蓉中的丁香酚苷等化学成分能够刺激性激素的分泌，有利于亲鱼的排卵排精，同时还能提高苗种质量。蚓激酶能激活人体的各种细胞，使其快速恢复正常生理功能和生物活性，有利于提高亲鱼产前的自身抵抗力以及产后亲鱼身体机能的恢复，同时还有利于亲鱼产卵排精。螺旋藻具有抗氧化效果，能够减少产卵排精时细胞氧化过激反应产生的氧自由基，同时还提高机体抗病能力，加快亲鱼产后修复及产卵排精能力。

而且不同比例的甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物对亲鱼的影响也不同，咸苁蓉提取物多其效果更好，而且同时添加甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物比单独使用其中一种的效果要好。说明甜苁蓉提取物和咸苁蓉提取物之间存在协同效果，这种效果不是单独使用某一种能够达到的。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。